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本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

• 如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
  
• 所有样品操作请置于冰上进行。
  
• 可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Nc-Buffer A:Nc-Buffer B:Nc-Buffer C=100:5.5:50。
  
• 可以采用更高的速度来离心。

• 细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
  
  • 请在蛋白抽提前取出抽提试剂Nc-Buffer A和Nc-Buffer C进行预冷
    
  • 收集细胞，计数。离心去上清。
    
  • 1×10⁷细胞中加入1mL Nc-Buffer A（按照1:99比例在蛋白抽提前2～3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail），涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。
    注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Nc-Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Nc-Buffer A及后续Nc-Buffer B、Nc-Buffer C的用量。
    
  • 加入55μL Nc-Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育1分钟。
    
  • 4℃ 12000rpm（~13400×g）离心15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提取液为胞浆蛋白）。
    
  • 向上步所得的沉淀中加入500μL Nc-Buffer C（使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail），涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15～30秒。
    
  • 4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提取液为胞核蛋白）。
• 组织中胞浆、胞核蛋白的提取
  
  • 取材，保存组织。
    
  • 在蛋白抽提前取出抽提试剂Nc-Buffer A和Nc-Buffer C进行预冷。
    
  • 称组织重量，每100mg组织中加入1mL Nc-Buffer A（按照1:99比例在蛋白抽提前2～3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail），用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20分钟。
    注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Nc-Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Nc-Buffer A及后续Nc-Buffer B、Nc-Buffer C的用量。
    
  • 加入55μL Nc-Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育1分钟。
    
  • 4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提取液为胞浆蛋白）。
    
  • 向上步所得的沉淀中加入500μL Nc-Buffer C（使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail），涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15～30秒。
    
  • 4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提取液为胞核蛋白）。